配置RPMI-1640培養(yǎng)基的注意事項你知道么?

　　配置RPMI-1640培養(yǎng)基的注意事項你知道么?今天就讓我們一起來了解一下吧啊。
 

　　配置RPMI-1640培養(yǎng)基的注意事項如下：
 

　　1)配制培養(yǎng)基最好使用新制備的三蒸水。一般在試驗前當天或前一天制備為好。調節(jié)pH值的酸堿溶液也應該使用這種水配制。
 

　　2)培養(yǎng)液配好后，應先抽取少許放入培養(yǎng)瓶內，于37℃溫箱內置24～48hr，以檢測培養(yǎng)液是否有污染。
 

　　3)溶解培養(yǎng)基：將干粉培養(yǎng)基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內面兩次，倒入培養(yǎng)液中。振蕩或超聲助溶，一般不要加熱助溶。
 

　　4) 補加試劑：根據包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3(2.0g)、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等其他試劑。
 

　　5) 加抗生素：一般抗生素終濃度為――青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml。市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，每一升培養(yǎng)液中加0.5ml即可。市售鏈霉素為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，每一升培養(yǎng)液中也加0.5ml即可。無鏈霉素的情況下，用慶大霉素代替，終濃度調為50～200U/ml。
 

　　6) 調pH值：加水到900ml(在需要加10%小牛血清的情況下)，然后用5% NaHCO3調節(jié)pH到7.2。
 

　　7) 過濾除菌：宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，以保證過濾效果。注意濾膜正面(光面)朝上。過濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。
 

　　8) 加小牛血清：根據培養(yǎng)基配制的量將小牛血清分裝，冷凍保存(-20℃)。臨用前將加入小牛血清(10%~20%)。
 

　　9)每次配液時，需要的其他輔助性液體(Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等)也可以同時配制，分別過濾。
 

　　10)市售小牛血清使用前都應該滅活(56℃，30min)，以消除補體活性。動物血清個體差異大，故而每一批血清都進行嚴格檢測，同時進行無菌試驗。優(yōu)質血清應該為淡黃色，透明，無溶血，無沉淀，滅活后顏色稍深。生化檢測總蛋白含量3.5~4.5g/100ml，球蛋白不高于2g/100ml。選定一個效果較好的批號后，可一次多購該批號的血清，保證試驗條件的穩(wěn)定。
 

　　11)由于市售小牛血清pH未知，但大多偏酸。試驗中加入小牛血清后，培養(yǎng)基的pH可能還會變化，故亦可先加入小牛血清后調pH值。但此種方法過濾較困難，只適于正壓過濾。
 

　　12)每次配液量以兩周左右為宜，一次配液不要太多，防止營養(yǎng)成分(主要為谷氨酰胺)損失，造成實驗繁瑣或者污染。
 

　　13)最后，制備培養(yǎng)基的器皿清洗要絕對干凈，烤干后備用(濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養(yǎng)基的小瓶等存放和轉移培養(yǎng)基液體的器具都應進行滅菌)。