了解這些使用GelRed核酸染料更加得心應(yīng)手

 　　GelRed核酸染料是一種可以替代溴化乙錠(EB)的紅色熒光核酸染色劑。由Biotium公司研發(fā)推出的EB替代染料，染色效果和EB差不多，在紫外下不容易淬滅，可以用于膠回收。但價(jià)格較貴。

　　GelRed核酸染料是一種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定性于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過(guò)美國(guó)環(huán)保局安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。其特點(diǎn)有：

　　1)高靈敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中zui靈敏的凝膠核酸染料之一;

　　2)穩(wěn)定性*：可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存;

　　3)廣泛的適應(yīng)性：適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色;

　　4)更安全：艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠(EB);

　　5)染色過(guò)程簡(jiǎn)單：與EB一樣，在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中不必?fù)?dān)心染料降解;而電泳后染色過(guò)程也只需30分鐘且無(wú)需脫色或沖洗;

　　6)對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響小：對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I?;

　　7)與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容：使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí)，GelRed 可以的替代EB;使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí)，GelGreen 足以替代任意一種 SYB染料。但該染料會(huì)使小片段DNA遷移慢一些(與EB相比)。

　　GelRed核酸染料的貯存：室溫避光保存一年;4℃避光保存三年。

　　GelRed核酸染料的使用方法：

　　一、GelRed預(yù)染方法

　　1.將GelRed試劑按1:10000溶于瓊脂糖凝膠溶液中，充分混勻。(例如：將5ul GelRed 試劑加入到50ml 凝膠溶液中)。注：由于GelRed 具有出色的熱穩(wěn)定性，可將試劑直接加入高溫的凝膠溶液中，而不用等凝膠溶液冷卻后再加入。

　　2.澆制凝膠并使其凝固后上樣電泳。注意：使用這種預(yù)先加入染色劑的瓊脂糖凝膠，每次不易加入太多的 DNA 樣品，否則容易造成飽和現(xiàn)象，可以做多個(gè)不同濃度的 DNA Marker，以確定* DNA 上樣量。

　　3.紫外下觀察結(jié)果。注：如果始終出現(xiàn)拖尾或是條帶無(wú)法分離的現(xiàn)象，您可以使用后染法對(duì)DNA染色，以確認(rèn)問(wèn)題是否與染色劑有關(guān)。如果使用后染法問(wèn)題依舊存在，則說(shuō)明問(wèn)題與染色劑無(wú)關(guān)，請(qǐng)嘗試減少核酸的上樣量后進(jìn)行電泳。

　　二、GelRed后染方法

　　1.用H2O將GelRed稀釋約3300倍到0.1M Nacl中，制成3X染色溶液。(例如：將15 μl GelRed和5ml的1M NaCl加入到45ml H2O中)。注：GelRed 1X染色溶液同樣可用于后染，但其靈敏度要低于3X染色溶液。

　　2.將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3X染色溶液浸沒(méi)凝膠。

　　3.在室溫下輕輕地?fù)u動(dòng)凝膠板，*的染膠時(shí)間為30 分鐘，這取決于凝膠板的厚度、瓊脂糖或聚丙烯酰胺的濃度和 DNA 的長(zhǎng)短。凝膠越厚或瓊脂糖的濃度越高，染色所需要的時(shí)間就越長(zhǎng)。注：染色溶液至少可重復(fù)使用2-3次。如果不是立即再用的話，建議將用過(guò)的染色溶液冷藏保存。

　　4.紫外下觀察結(jié)果。

　　注意：GelRed核酸染料使用前應(yīng)在室溫下*融化混勻后使用。

　　了解以上內(nèi)容，對(duì)我們使用GelRed核酸染料很有幫助，讓我們使用GelRed核酸染料更加得心應(yīng)手。